OBJETIVO
Clasificar sustancias con potencial de sensibilización de la piel.
Consideraciones Iniciales, Implicaciones y Limitaciones
El LLNA: BrdU-ELISA ha sido recomendado como útil para la identificación de productos químicos para pruebas de sensibilización y no sensibilización de la piel, con ciertas limitaciones.
El LLNA: BrdU-ELISA es un método de LLNA no radiactivo modificado para identificar posibles productos químicos de prueba de sensibilización de la piel, con limitaciones específicas. Esto no implica necesariamente que en todos los casos el LLNA: BrdU-ELISA se debe usar en lugar del LLNA radiactivo (OECD TG 429) o las pruebas de cobayos (OECD TG 406).
Se considera toda la información disponible sobre el producto químico de prueba antes de realizar el estudio.
Al igual que otros métodos de prueba de LLNA, el LLNA: BrdU-ELISA tiene, sin embargo, el potencial de reducir el uso de animales para este propósito en comparación con las pruebas de cobayos (OECD TG 406).
Además, el LLNA: BrdU-ELISA ofrece un refinamiento sustancial de la forma en que se utilizan los animales para las pruebas de sensibilización alérgicas por contacto, ya que a diferencia del OECD TG 406, el LLNA: BrdU-ELISA:
- no requiere que se produzcan reacciones de hipersensibilidad dérmica inducidas por el desafío.
- no requiere el uso de un adyuvante, como es el caso de la prueba de maximización de cobayos, reduciendo la angustia animal.
A pesar de las ventajas de la prueba LLNA: BrdU-ELISA sobre OECD TG 406, existen ciertas limitaciones aplicables a la prueba LLNA, que pueden requerir el uso de OECD TG 406:
- ciertos metales, resultados falsos positivos con ciertos irritantes para la piel (como algunas sustancias de tipo surfactante), solubilidad de los productos químicos de prueba (como sustancias raramente solubles o no solubles).
- sustancias químicas que contienen grupos funcionales que actúan como factores de confusión potenciales (ej., glutamato de ácido graso, ácido oleico, éster de ácido oleico, alcohol graso 1, alcohol graso 2, siloxano poliaminofuncional).
- otras limitaciones que se han identificado para el LLNA también se han recomendado para aplicar al LLNA: BrdU-ELISA.
- debe ser aplicable para probar cualquier producto químico de prueba, a menos que haya propiedades asociadas con estas sustancias que puedan interferir con la precisión del LLNA: BrdU-ELISA.
- considerar la posibilidad de resultados límite positivos cuando se obtienen valores del Índice de Estimulación (SI) entre 1,6 y 1,9 en el LLNA: BrdU-ELISA.
Principio de la Prueba
El principio básico que subyace en el LLNA: BrdU-ELISA es que los sensibilizadores inducen la proliferación de linfocitos en los ganglios linfáticos que drenan el sitio de aplicación del químico de prueba.
Esta proliferación es proporcional a la dosis y a la potencia del alérgeno aplicado y proporciona un medio simple para obtener una medición cuantitativa de la sensibilización.
La proliferación se mide comparando la proliferación media en cada grupo de prueba con la proliferación media en el grupo de control tratado con vehículo (CV).
Se determina la proporción de la proliferación media en cada grupo tratado con respecto a la del grupo CV, denominado SI, y debe ser ≥1,6 , ya que se garantiza como sensibilizador potencial de la piel.
El método se basa en el uso de la medición del contenido de BrdU para indicar un mayor número de células en proliferación en los ganglios linfáticos auriculares de drenaje. BrdU es un análogo de la timidina y se incorpora de manera similar en el ADN de las células en proliferación.
La incorporación de BrdU se mide mediante ELISA, que utiliza un anticuerpo específico para BrdU que también está marcado con peroxidasa. Cuando se agrega el sustrato, la peroxidasa reacciona con el sustrato para producir un producto coloreado que se cuantifica en una absorbancia específica utilizando un lector de placas de microtitulación.
REFERENCIAS
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